技術(shù)支持Article
細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用
點擊次數(shù)：1078 更新時間：2022-11-08
細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用，在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下，部分細(xì)胞因子會明顯變化，根據(jù)這些指標(biāo)可以判斷機(jī)體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細(xì)胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價,具有重要的應(yīng)用價值。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細(xì)胞術(shù)是細(xì)胞因子檢測的一種方法。
CBA(cytometric bead array）法是新發(fā)展起來的利用流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞因子的新方法，該方法直接檢測分泌到細(xì)胞外的處于游離狀態(tài)的細(xì)胞因子。流式細(xì)胞術(shù)不能直接檢測細(xì)胞因子，CBA技術(shù)利用人工合成的微球（如直徑為7.5µm的聚苯乙烯微球）代替細(xì)胞，在該做球上包被細(xì)胞因子抗體，當(dāng)待測樣品中含有相應(yīng)的細(xì)胞因子時，人工微球上的抗體能夠與細(xì)胞因子結(jié)合，然后再加入PE偶聯(lián)的抗細(xì)胞因子抗體，該P(yáng)E偶聯(lián)抗體就可以與微球上結(jié)合的細(xì)胞因子結(jié)合，形成“三明治夾心”結(jié)構(gòu)。其基本原理與ELISA法檢測細(xì)胞因子具有相似之處，只是ELISA法利用的是酶系統(tǒng)，通過使底物顯色，計算顏色的深淺來定量細(xì)胞因子，而CBA能利用的是熒光系統(tǒng)，通過激發(fā)PE熒光素，分析熒光信號的強(qiáng)弱來定量細(xì)胞因子。
CBA穩(wěn)定性好、可重復(fù)性高，能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號失真導(dǎo)致的假陽性。
流式細(xì)胞術(shù)檢測用于細(xì)胞因子檢測是一種相對快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜，涉及變異因素多，可能會出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定，較難重復(fù)等問題。
如在檢測血清時，由于血清成分復(fù)雜，細(xì)胞因子含量差距大，實驗中經(jīng)常會出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象，對實驗結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙烯材料制作而成，血清加入微球之后如果沒有充分渦旋，容易沉淀聚集，細(xì)胞因子不能充分跟微球結(jié)合，導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生，檢測結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管，直到上機(jī)檢測前每一步都必須充分渦旋，以避免微球發(fā)生聚集。
